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84農(nóng)業(yè)網(wǎng) 時間：2018-03-14 作者：佚名 來源：網(wǎng)絡(luò)整理
自1926年認(rèn)識新城疫(ND)以來，許多國家都把ND看作是地方性流行病。除少數(shù)幾個國家按商業(yè)級別生產(chǎn)家禽外，所有國家都作預(yù)防免疫接種。
雞新城疫病毒(NDV)不同毒株的最特征的性質(zhì)之一，是對雞的致病性差別很大。根據(jù)在感染雞所引起的臨床癥狀可將NDV毒株分為5個群或病型，它們是：親內(nèi)臟的強毒力型，特點是高致病性，常常見到腸出血病變；親神經(jīng)的強毒力型，特點是有高的殘廢率，常有呼吸和神經(jīng)癥狀；中等毒力型，特點是有呼吸癥狀，偶有神經(jīng)癥狀，但殘廢率低；溫和型或呼吸型，特點是癥狀溫和或者亞臨床型呼吸道感染；無癥狀的腸型，特點是常為亞臨床型腸感染。
病型的劃分很難界限分明，甚至在感染的無特定病原(SPF)雞上也可以看到各型癥狀的重疊。此外，當(dāng)與其他微生物混合感染或者當(dāng)環(huán)境惡化時，溫和毒株也可引起明顯的臨床癥狀。
由于雞感染后的臨床癥狀差別很大，不同宿主對感染的反應(yīng)也不一樣，這使診斷更為復(fù)雜。因此依據(jù)單一臨床癥狀不能作為診斷ND的基礎(chǔ)。若出現(xiàn)強毒力病型的有關(guān)癥狀和病變應(yīng)懷疑本病。
●病原鑒定：
1.樣品采集
從死禽采集的樣品有口鼻拭子，還有肺、氣囊、腸、脾、腦、肝和心組織，這些樣品可單獨或混合采集。
從活禽采集的樣品應(yīng)包括氣管和泄殖腔拭子。在采集樣品機會少的地方，除了受感染的或者有相關(guān)臨床癥狀的器官和組織外，主要的應(yīng)是泄殖腔拭子(或糞便)和氣管拭子(或者氣管組織)。
2.樣品處理
樣品置于含抗生素的磷酸鹽緩沖液(pH7.0至7.4)中，抗生素視具體情況而變化，但對組織和氣管拭子應(yīng)含青霉素(2000單位/ml)，鏈霉素(2mg/ml)，卡那霉素(50μg/ml)和制霉素(1000單位/ml)，而對糞便和泄殖腔拭子其濃度要提高5倍。加入抗生素后調(diào)節(jié)pH值到7.0至7.4是很重要的。糞便和攪碎的組織，應(yīng)用抗生素溶液制成10至20％的懸液。樣品應(yīng)盡可能快地處理，首先在室溫下靜置1至2小時。沒有條件的話，樣品可在4℃保存幾天。
3.樣品檢查
糞便或組織的懸浮液經(jīng)離心后取上清液，尿囊腔接種至少5個9至11天的SPF雞胚，在35℃～37℃培育4至7天。收集死的和快死的以及培養(yǎng)結(jié)束時活下來的雞胚尿囊液，于4℃致冷，隨后檢測尿囊液的HA活性。陰性者至少用另一批蛋再傳代一次。
用特異性的抗血清可以證實NDV的存在，通常使用雞的抗血清，它們是用NDV毒株中的一個毒株制備的。
試驗以相同的血清PBS作連續(xù)對倍稀釋，每孔0.025ml，隨后每孔加入4個血凝單位的抗原0.025ml，作用15至30分鐘后，加入1％的0.025ml雞紅細(xì)胞，輕輕混勻，45分鐘判定結(jié)果。能完全抑制4個抗原的血清最高稀釋度即為血凝抑制(HI)滴度。將板傾斜判讀，凝集試驗更準(zhǔn)確。只有那些孔的紅細(xì)胞同不含病毒對照孔的紅細(xì)胞出現(xiàn)相同的“流動”時才認(rèn)為是血凝抑制。
有些非雞的禽類血清含有對雞紅細(xì)胞所特有的非特異性凝集素，因此，可用雞血紅細(xì)胞吸收試驗血清，以排除凝集素或者采用研究對象的動物種的紅細(xì)胞。
4.分離株毒力評價
不同NDV分離株的毒力很不相同，而且由于新城疫活苗的廣泛應(yīng)用，僅從具有臨床癥狀的病禽分離出病毒進(jìn)行鑒定，不能構(gòu)成對ND的診斷，還應(yīng)進(jìn)行分離物毒力的評定。NDV分離株的致病性不能在體外進(jìn)行，所以評估致病性常根據(jù)下面一種或多種試驗來確定。
a)雞胚平均死亡時間(MDT)
將新鮮的感染尿囊液用生理鹽水連續(xù)10倍遞增稀釋成6Log10～9Log10，每個稀釋度接種5個9至10日齡的SPF雞胚，每個雞胚接種0.1ml，隨后置于37℃。剩余下的病毒稀釋液保存于4℃，于8小時后，每個稀釋度接種另外5個雞胚，每個雞胚接種0.1ml，置于37℃培養(yǎng)。每天觀察二次，共觀察7天。每次觀察都要記錄每個雞胚死亡的時間。
利用雞胚平均死亡時間可將NDV株分為強毒力型，其死亡時間低于或等于60小時；中等毒力型，其死亡時間在61至90小時之間；溫和型，其死亡時間大于90小時。
b)腦內(nèi)致病指數(shù)(ICPI)
4Log2以上血凝滴度的新鮮感染尿囊液，用等滲無菌鹽溶液作10倍稀釋，不加添加劑，腦內(nèi)接種1日齡的SPF雛雞，共接種10只，每只接種0.05ml。每24小時觀察一次小雞，共觀察8天。每一天觀察應(yīng)給雞打分，正常雞記作0，病雞記作1，死亡雞記作2，腦內(nèi)致病指數(shù)是每只雞8天內(nèi)所有每次觀察數(shù)值的平均數(shù)。最強毒力病毒的腦內(nèi)致病指數(shù)將接近最大值2.0，而溫和型毒株的值接近0。
c)靜脈致病指數(shù)(IVPI)
血凝滴度高于4Log2的新鮮的尿囊液用滅菌等滲鹽水作1∶10稀釋，由靜脈接種6周齡的SPF小雞，接種10只，每只接種0.01ml。每天觀察一次，共10天。每次觀察要記分，正常雞記作0，病雞記作1，癱瘓雞記作2，死亡雞記作3，靜脈致病指數(shù)是指10天內(nèi)每次觀察每只雞記錄的平均數(shù)。溫和型毒株和一些中等毒力型毒株的值為0，而強毒力型毒株可達(dá)到3.0。但這些試驗也可有較小的改動。用未稀釋的尿囊液擦拭6周齡的雞的泄殖腔和結(jié)膜代替上述試驗，其目的在于區(qū)別親內(nèi)臟的強毒力型和其他強毒力型病毒。
●血清學(xué)試驗
ND病毒可作為抗原，用于各種血清學(xué)試驗，例如中和試驗和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。目前大都使用血凝抑制試驗。雞血清在這種試驗中很少有非特異性反應(yīng)，所以血清不要作預(yù)處理。除雞以外的其他禽種血清，有時對雞的紅細(xì)胞有凝集作用，故試驗前應(yīng)首先測定這種特性，然后用雞紅細(xì)胞對試驗血清進(jìn)行吸附，以排除非特異性凝集。
國際ND參考血清可從英國蘇里州的中心獸醫(yī)實驗室國際生物標(biāo)準(zhǔn)實驗室獲得。用它來標(biāo)定實驗室的參考血清。
在診斷中血清學(xué)的值同感染家禽的免疫狀態(tài)有關(guān)。如果按1∶8稀釋的血清或者高于這個稀釋度能抑制4個血凝單位的抗原，被判為陽性。
為評價雞群的免疫狀況可用血凝抑制試驗，當(dāng)我們正在對免疫過的雞群進(jìn)行監(jiān)測，有可能檢出突然升高的抗體應(yīng)答，這是野毒感染所致，但應(yīng)注意其他原因引起的變化，例如已免疫新城疫病毒的火雞再感染PMV―3病毒時，滴度會升高。
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