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84農(nóng)業(yè)網(wǎng) 時間：2018-03-14 作者：佚名 來源：網(wǎng)絡(luò)整理
鳥禽類大腸桿菌和沙門氏桿菌混合感染是當(dāng)前禽病流行中的主要趨勢，是養(yǎng)禽業(yè)的常見病和多發(fā)病。2種細(xì)菌血清型種類較多，不同地區(qū)差別較大；不同菌株之間不產(chǎn)生交叉保護作用，極易產(chǎn)生耐藥性。一旦鳥禽發(fā)病，治療時間長、難度大。
某地野生動物園的一群美國綠頭野鴨，在2002年7月中旬突然發(fā)病，表現(xiàn)為腳軟、不能站立、拉稀、精神不振，死亡率高，曾用青霉素、四環(huán)素等藥物治療無效。為了確診，將病死野鴨進行細(xì)菌分離、培養(yǎng)、生化鑒定、藥敏試驗等。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。
1材料與方法
1.1材料
1.1.1主要儀器。高壓滅菌鍋，電子天平，生化培養(yǎng)箱，顯微鏡，恒溫箱，無菌操作臺。
1.1.2被檢材料。病死野鴨的心血、肝等組織。
1.1.3培養(yǎng)基。普通瓊脂、胰蛋白胨、瓊脂培養(yǎng)基。
1.1.4藥敏紙片。青霉素、四環(huán)素、萬古霉素、桿菌肽、妥布霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、苯唑青霉素、阿米卡星、頭孢噻肟、頭胞呋新、卡那霉素、氧氟沙星、壯觀霉素共14種藥敏紙片。
1.1.5微量發(fā)酵管。葡萄糖、賴氨酸、鳥氨酸、硫化氫、蛋氨酸、乳糖、衛(wèi)矛醇、苯丙氨酸、尿素酶、枸椽酸、氨基酸（對照級）共11種微量發(fā)酵管。
1.1.6姬姆薩氏染液。
1.1.7試驗動物。8只10～20g昆系小白鼠，由西南農(nóng)業(yè)大學(xué)榮昌校區(qū)動物科提供。
1.2方法
1.2.1染色鏡檢。取病死野鴨心血、肝抹片或涂片，按常規(guī)姬姆薩氏染色后鏡檢。
1.2.2分離培養(yǎng)。無菌采集病野鴨心血、肝等，分別接種普通肉湯和胰蛋白胨肉湯，37℃培養(yǎng)24h后觀察。若有細(xì)菌生長，再劃線接種普通瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h。
1.2.3純化細(xì)菌。將普通瓊脂平板上的細(xì)菌接種到SS瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h，分別挑取單個菌落接種普通肉湯，37℃培養(yǎng)24h，純化并進行編號，備用（紅色菌落編為1號，灰白色菌落編為2號，黑色菌落編為3號）。
1.2.4接種動物。將病料組織接種普通肉湯后生長的細(xì)菌，接種小白鼠，腹腔注射0.3mL/只，接種后觀察發(fā)病和死亡情況。
1.2.5鏡檢。挑取SS瓊脂上的不同菌落和純化后的細(xì)菌肉湯分別涂片，革蘭氏染色，鏡檢。
1.2.6藥敏試驗。將純化的1、2、3號菌落按常規(guī)方法接種在SS瓊脂上，劃線，貼上藥敏紙片，37℃恒溫培養(yǎng)24h，觀察抑菌圈的大小，記錄結(jié)果。
1.2.7生化試驗。將純化后的3種菌落，分別按常規(guī)方法接種于細(xì)菌微量發(fā)酵管中，37℃培養(yǎng)24h觀察7d，記錄結(jié)果。
2結(jié)果
2.1病料涂片姬姆薩氏染色鏡檢，可見有大量散在的、單個的、纖細(xì)的染成淡紫色的細(xì)長桿菌存在，3株純化菌涂片革蘭氏染色鏡檢，可見紅色、兩端鈍圓、散在短小桿菌。
2.2病菌分離培養(yǎng)在普通肉湯和胰蛋白胨肉湯中，可見均有細(xì)菌生長、肉湯混濁、試管底部有沉淀。接種SS瓊脂平板，可見有紅色、灰白色和頂端為黑色的3種菌落，細(xì)菌形態(tài)為光滑、濕潤、隆起。
2.3生化試驗培養(yǎng)分離的1號菌，能分解葡萄糖、賴氨酸、衛(wèi)矛醇、枸椽酸，不產(chǎn)生H2S，不分解鳥氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、尿素、氨基酸；而2、3號菌，能分解葡萄糖、賴氨酸、衛(wèi)矛醇、鳥氨酸、氨基酸，產(chǎn)生H2S，但不發(fā)酵乳糖，也不分解蛋氨酸、苯丙氨酸，其中2號菌能分解尿素酶。
2.4動物接種混合菌接種小白鼠，于十幾小時后小白鼠死亡，共死亡7只。剖解見心包積液，小腸出血，心冠狀脂肪小點出血，并從死亡小白鼠心血中分離到混合接種菌。
2.5藥敏試驗通過試驗，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌分離株（1號菌）和沙門氏桿菌分離株（2號強菌），對頭孢噻肟、阿米卡星、壯觀霉素高敏，對青霉素、四環(huán)素等產(chǎn)生耐藥性。參照藥敏判斷標(biāo)準(zhǔn)。
3討論與分析
病理剖檢可見，病鴨心肌出血、肝瘀血腫大、小腸出血；細(xì)菌染色鏡檢可見，兩端鈍圓的、散在的、短小桿菌；SS瓊脂培養(yǎng)基上，有圓形、光滑、濕潤、隆起的菌落生長；生化試驗結(jié)果顯示：紅色、黑色和灰白色菌落都能分解葡萄糖、賴氨酸、鳥氨酸，且紅色菌落能分解乳糖，黑色菌落和灰白色菌落能產(chǎn)生H2S。由此確診該野鴨為大腸桿菌和沙門氏菌混合感染。
從生化試驗結(jié)果可以看出，本次分離的紅色菌落能分解葡萄糖、賴氨酸、鳥氨酸、乳糖，不產(chǎn)生H2S，不分解尿素酶（與方定一對大腸桿菌生化試驗結(jié)果基本一致）；但分離的紅色菌落不分解鳥氨酸，這可能與不同菌株的大腸桿菌有關(guān)。分離的黑色菌落和灰白色菌落能分解葡萄糖、賴氨酸，不發(fā)酵乳糖，不分解尿素酶，對苯內(nèi)氨酸不脫氨（與董國雄報道的沙門氏菌生化試驗結(jié)果基本一致）；但本次的沙門氏桿菌分離株能水解尿素酶，這可能與沙門氏菌的血清型不同有關(guān)。
藥敏試驗結(jié)果表明：本試驗的3株分離菌，對頭孢噻肟、頭孢呋新、環(huán)丙沙星、卡那霉素呈現(xiàn)高敏。除此之外，大腸桿菌分離株還對壯觀霉素、丁胺卡那霉素高敏，但對四環(huán)素、妥布霉素出現(xiàn)耐藥；沙門氏菌分離株，還對壯觀霉素、妥布霉素高敏，但對四環(huán)素中敏和對青霉素、桿菌肽和萬古霉素產(chǎn)生耐藥。引起這些結(jié)果的原因，可能與大腸桿菌和沙門氏桿菌的血清型不同或長期用藥的原因，這在周倫江、龍虎、張健、程安春、張文慧的研究中有類似的報道。
藥敏試驗表明，本次分離到的大腸桿菌和沙門氏桿菌，對頭孢類藥物最敏感，所以給野鴨群投以復(fù)方先鋒霉素（頭孢唑啉）后病情得到了控制。因此，在診療中，宜及時進行藥敏試驗，選擇高敏藥物治療，可達到較好效果。
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