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豬細胞巨化病毒性感染

84農(nóng)業(yè)網(wǎng)　　時間：2018-03-14 　　作者：佚名　　來源：網(wǎng)絡(luò)整理

豬細胞巨化病毒感染是豬細胞巨化病毒引起仔豬一種常見傳染病。在易感豬群中可引起胚胎死亡和仔豬鼻炎、肺炎及生長發(fā)育不良、增重差等臨床癥狀。

Done(1955)在豬鼻甲骨黏膜黏液腺中巨細胞中發(fā)現(xiàn)有大量嗜堿性核內(nèi)包涵體，首次從英格蘭分離獲得皰疹樣病毒粒子；這是繼偽狂犬病病毒之后發(fā)現(xiàn)的第二個豬的皰疹病毒。因患豬臨床上以鼻炎為特征，并在感染的鼻甲骨黏膜黏液腺中巨細胞可見到大量嗜堿性核內(nèi)包涵體，因而將PCMV引起的這種疾病稱為包涵體鼻炎。據(jù)電鏡觀察，病毒的性質(zhì)及其所致病變與人的細胞巨化病毒和豚鼠的唾液腺病毒類似，而本病毒的感染動物的范圍僅限于豬，故又將該病毒稱為豬細胞巨化病毒(PCMV)。本病毒分布相當(dāng)廣泛。從近年的報道看，常規(guī)條件下飼養(yǎng)的大多數(shù)豬群均存在PCMV感染，PCMV抗體陽性率都很高，但大多數(shù)為亞臨床型，臨床發(fā)病則很少見。歐洲很多國家都發(fā)現(xiàn)有本病。德國用PCR方法，調(diào)查豬的流行率要高于50%。在英國進行的血清學(xué)檢查的結(jié)果表明：90%以上的豬群曾受到過感染，通過ELISA或IFA檢測，發(fā)現(xiàn)98%以上的豬血清呈陽性。在日本自1972年就有本病病理學(xué)方面的報道，1981年6～11月，對441例肥育豬血清用間接熒光抗體法做了抗體調(diào)查，有434例(98.4%)為陽性。用ELISA所作的調(diào)查，436份樣品有433份(99.4%)為強陽性，并于1985年首次分離到病毒。北美和澳大利亞也有報道，其中美國發(fā)病率甚高，豬群的抗體保有率為90%。說明凡飼養(yǎng)豬只的地區(qū)，都可能有本病毒的感染。

1病原學(xué)

1.1形態(tài)結(jié)構(gòu)

PCMV屬于皰疹病毒科，β皰疹病毒亞科、巨細胞病毒屬的成員；近來有人認為將本病毒劃在玫瑰疹病毒屬中更為恰當(dāng)［3］?。PCMV在形態(tài)上屬于典型的皰疹病毒，中央為電子致密的芯髓，芯髓常為卵圓形、也有長方形到啞鈴狀，其直徑為45～70nm。在芯髓外圍為正十二面體核衣殼，其直徑約80～100nm，最外圍為囊膜，多為單層，偶爾也有雙層，有囊膜的病毒顆粒直徑為120～150nm。囊膜上還有纖突。核衣殼與囊膜之間似乎有一圈半透明帶包圍著電子致密外套相分隔。感染病毒后的細胞體積極度增大，可達正常細胞的6倍，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體也出現(xiàn)腫脹，超薄切片可見巨大的核內(nèi)包涵體，常呈結(jié)晶體樣排列。在病毒復(fù)制后期的細胞裂解過程中，在細胞漿中也可看到晶體樣排列的病毒。與所見到的其他皰疹病毒中一樣，也常常見到?jīng)]有芯髓或無囊膜僅有核衣殼的病毒粒子。

最近日本學(xué)者Goltz等(2000)采用PCR方法擴增了PCMV的DNA聚合酶基因，并進行測序。對德國株的DNA聚合酶(DPOL)位點進行了擴增，測定了2個完整開放性閱讀框(ORF)及包括完全DPOL基因和糖蛋白gB3′端的2個部分ORF序列。推導(dǎo)的氨基酸序列與β?皰疹病毒的各個蛋白有很高的同源性，特別是與人皰疹病毒6型和7型的ORF?36～39同源性更高。與日本株、西班牙株、英國株的DPOL基因比較，僅有0.4%～1%的差異。對PCMV的主要衣殼蛋白(MCP)基因也得以鑒定。序列分析表明，PCMV的MCP基因全長4026個核苷酸，編碼1341個氨基酸的蛋白，據(jù)預(yù)計MCP的分子量為151，456Da，系統(tǒng)發(fā)育分析認為，PCMV與人皰疹病毒6型或7型的同源性高于與人或鼠細胞巨化病毒的同源性。人工感染PCMV的血清不能與細菌表達的MCP反應(yīng)，表明POMV的MCP可能與感染后體液免疫應(yīng)答無關(guān)。

1.2病毒培養(yǎng)

PCMV在體外增殖有一定難度，用豬的腎或睪丸原代細胞、末梢血液中的巨噬細胞以及豬腎細胞系培養(yǎng)，均不能增殖，但直接用已感染了病毒的豬腎或睪丸，作細胞帶毒培養(yǎng)，病毒則可充分增殖，并出現(xiàn)細胞病變。在原代細胞中只有3～5周齡仔豬的肺泡巨噬細胞最適宜于病毒的首次分離和連續(xù)傳代。PCMV在豬肺泡巨噬細胞培養(yǎng)物上增殖很慢，接種后3～14天才可看到巨細胞形成和核內(nèi)包涵體，偶爾還可見細胞漿內(nèi)包涵體，但其大小比核內(nèi)包涵體要小。在接種11～14天后，PCMV的最高滴度可達5.5TCID50/ml。然而，肺泡巨噬細胞自身不能繁殖，因此，必須用原代細胞培養(yǎng)物進行病毒的傳代。由于肺泡巨噬細胞經(jīng)常受到包括PCMV和PRRSV在內(nèi)的病毒污染，故在細胞使用之前要對這些病毒進行監(jiān)測，確保安全可靠、無污染。較可靠的辦法是使用無菌豬或SPF豬肺泡巨噬細胞。據(jù)KawamuraH等報道，豬輸卵管細胞可支持該病毒復(fù)制，Bouillant等建立了輸卵管類上皮和輸卵管類成纖維細胞，可以用于病毒培養(yǎng)。其細胞病變不明顯，必須用姬姆薩染色或標(biāo)記抗體染色后觀察。另有報道，十四烷酰佛波醇乙酸酯(120tertadecanoylphorbol13?acetate)能增強病毒的復(fù)制。

1.3抗原特性

有關(guān)豬包涵體鼻炎病毒抗原特性的研究很少，迄今為止，僅對世界不同國家的7個PCMV分離物的ELISA特性進行了比較，發(fā)現(xiàn)OF1株在血清學(xué)上與Chiba2和Hiroshima株有明顯不同。同時Chiba2株與ChibaC株之間、ChibaC株與KagawaS株之間也有不同，而英國的B6株與OF2、Chiba2、ChibaC和Hiroshima等株也表現(xiàn)有血清學(xué)差異。以上資料表明PCMV不同地區(qū)分離株之間可能存在抗原結(jié)構(gòu)的差異。本病毒的抗原特異性較強，與其他皰疹病毒尚未發(fā)現(xiàn)有交叉反應(yīng)。?

1.4抵抗力

該病毒在56℃經(jīng)30min滅活。22℃只能保持24h活性。但將患病仔豬鼻黏膜組織保存于-30℃，其感染力至少可維持5個月，病毒液在-60℃下可保存2年以上。PCMV對有機溶劑(如氯仿和乙醚)敏感，經(jīng)過這些試劑處理，可使其喪失感染力。?

2流行病學(xué)?

PCMV在體內(nèi)外有高度的宿主特異性，僅豬感染，尚未發(fā)現(xiàn)其他實驗動物感染的報道，例如兔、小鼠、蒼鼠、雞胚和牛均不感染。PCMV最易傳染和擴散的途徑是上呼吸道。通常認為1個月齡左右的豬是經(jīng)鼻感染的，仔豬可能主要是通過與母豬接觸而感染。病毒可由鼻、眼分泌物及子宮頸黏液等排出尿液也會加大環(huán)境污染�？赡芙�(jīng)飛沫和吮乳途徑在豬群中呈水平傳播。本病毒還可通過胎盤傳播，垂直感染胎兒，從初次感染PCMV懷孕母豬的眼、鼻分泌液、尿液和子宮頸黏液中都可以分離出病毒。也可從公豬的睪丸和附睪中分離出該病毒，所以通過交配也能發(fā)生傳染。與其他細胞巨化病毒一樣，PCMV主要是一種“機會性感染”的病毒，用不排毒的5～6月齡豬的肺泡巨噬細胞進行培養(yǎng)，幾乎可100%地分離出PCMV。根據(jù)病毒能持續(xù)感染肺泡巨噬細胞這一事實，推測該病毒可能具有免疫抑制作用。實際上在長途運輸、寒冷、分娩等應(yīng)激因素作用下或使用類皮質(zhì)激素后，處于潛伏感染狀態(tài)的豬只，病毒可被激活并重新排毒。

3臨床癥狀?

潛伏期14～21天。臨床癥狀隨年齡和生理狀態(tài)不同，有很大差異。無論在實驗室還是在野外條件下PCMV可引起木乃伊、死產(chǎn)和新生仔豬死亡，以仔豬鼻炎、肺炎與生長發(fā)育不良。感染率隨豬群而異，從12%～90%，死亡率最高時達25%。?妊娠母豬感染后在整個妊娠期未見有發(fā)熱或其他臨床異常，但在病毒血癥階段常常會嗜眠、食欲不振，如首次感染發(fā)生于妊娠后期的母豬，則引起胚胎死亡、木乃伊胎、死產(chǎn)和不育等繁殖障礙。有些仔豬出生后可能未見有臨床癥狀即死亡，有些弱仔表現(xiàn)為貧血、皮膚或黏膜蒼白、不同程度的水腫、生長及發(fā)育不良。

本病常發(fā)生于1～3周齡的仔豬，發(fā)病程度與初乳中獲得母源性抗體多少有關(guān)。生后5～10日齡仔豬感染后，呈現(xiàn)急性經(jīng)過，其主要癥狀是呼吸道癥狀，如噴嚏、咳嗽、流淚、鼻分泌物增多，繼之出現(xiàn)鼻塞、吮乳困難，體重很快減輕，如果無母源抗體的仔豬感染則可能發(fā)生鼻衄。嚴(yán)重時還可見仔豬顫抖和呼吸困難等癥狀�？稍诎l(fā)病后5天死亡，一窩仔豬中死淘率可高達25%，其他耐過的仔豬表現(xiàn)生長發(fā)育不良，增重變慢。少數(shù)病例發(fā)生鼻甲骨的萎縮和顏面變形，據(jù)稱可能與混合感染有關(guān)。據(jù)野外長期觀察發(fā)現(xiàn)，PCMV和支氣管敗血波氏桿菌之間的協(xié)同作用。

一些3周齡以內(nèi)的豬只表現(xiàn)輕度的呼吸道感染的癥狀，病理檢查時有上皮感染的廣泛性損害，其發(fā)病率與死亡率都很低。如果無并發(fā)或繼發(fā)其他感染的話，3周齡以上的豬PCMV感染后通常表現(xiàn)為亞臨床型。但有些初次感染的成年豬與妊娠母豬相似，體溫也不高，但在病毒血癥階段會出現(xiàn)嗜眠、食欲不振，并產(chǎn)生全身性感染的損害。

3月齡以上的豬感染無明顯的癥狀。康復(fù)豬常成為隱性感染，長期排毒，這些存活豬都是危險的傳染源。?

4病理變化?

大體病變

病豬的主要病變在上呼吸道，鼻黏膜表面附有卡他性?膿性分泌物，深部黏膜因細胞聚集而形成灰白色小病灶。此外常見全身的瘀點和水腫，尤其是肺、胸腔、喉頭及跗關(guān)節(jié)皮下組織。肺小葉間隔因滲出液充盈而增寬，尖葉、心葉和膈葉的頂端實變，呈紫紅色。腎由于廣泛瘀點和水腫，而外觀呈斑點狀或完全發(fā)紫、發(fā)黑。全身淋巴結(jié)腫大并有瘀點，偶爾在小腸也可見出血，病變從短于1cm的區(qū)域至全腸段不等。

胎兒感染無肉眼可見的特征性病變。

病理組織學(xué)

較大豬中上皮組織的廣泛性感染與胎兒或新生仔豬的網(wǎng)狀內(nèi)皮組織全身性感染是不同的。在較大豬的鼻黏膜腺、副淚腺及淚腺的腺泡和導(dǎo)管上皮、腎小管上皮中，可見到特征性的嗜堿性核內(nèi)包涵體及巨細胞，在這些組織中可能有大量的細胞被感染。在食管的黏膜腺、附睪管、輸精管、十二指腸和空腸黏膜的上皮細胞中也見到少量的包涵體。在這些病變部位，淋巴細胞、漿細胞和巨噬細胞浸潤于感染的上皮組織周圍，并侵入腺泡。在腺泡損傷處，由導(dǎo)管增生的鱗狀上皮取而代之，在鼻甲骨黏膜中有局灶性淋巴組織增生。腎表現(xiàn)為間質(zhì)性腎炎的病變。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)可見到稀少的局灶性膠質(zhì)細胞增生，有時在膠質(zhì)細胞中可看到包涵體。

在引起胎兒感染的急性致死性綜合征中，包涵體多見于毛細血管內(nèi)皮細胞和竇狀隙細胞中，故在所有淋巴和實質(zhì)組織中均可發(fā)現(xiàn)包涵體。上皮損傷造成局部水腫、出血，巨噬細胞和紅細胞滲出到擴張的細胞外間隙中。在血管和脾臟可見到含有包涵體的單核細胞，肺泡組織中則以感染的巨噬細胞為主。在肝細胞內(nèi)的病毒復(fù)制造成肝臟局灶性壞死，在腎臟，包涵體多見于分化的腎組織和腎小球毛細血管內(nèi)皮。出血和膠質(zhì)細胞增生遍及整個中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是在脈絡(luò)叢、小腦和嗅葉。野外暴發(fā)時，由于并發(fā)感染而使病變更為復(fù)雜化。據(jù)報道，這些感染有黏液性?化膿性鼻炎、肺炎和腸炎等。?

5實驗室診斷?

呈現(xiàn)傳染性鼻炎癥狀的仔豬，特別是1～3周齡的患鼻炎病豬，要考慮到發(fā)生本病的可能性。對表現(xiàn)出類似SMEDI綜合征的繁殖障礙母豬，必須同細小病毒、豬腺病毒以及偽狂犬病毒感染豬做出鑒別診斷。本病毒感染在上皮細胞內(nèi)形成巨大的嗜堿性核內(nèi)包涵體和不引起流產(chǎn)，與上述疾病有不同之處。

5.1病毒分離與鑒定

懷疑豬群中是否有PCMV感染，可采集胎兒或新生仔豬的鼻汁，或鼻腔、喉頭、結(jié)膜等拭子以及肺、腎、淋巴結(jié)等材料，接種肺泡巨噬細胞或輸卵管類成纖維細胞，進行病毒分離，也可以用肺泡巨噬細胞直接培養(yǎng)分離病毒。接種病料后培養(yǎng)7～14天，觀察細胞病變。用熒光抗體染色檢查細胞核內(nèi)包涵體出現(xiàn)情況，或檢查細胞漿內(nèi)的熒光抗原。如用已知標(biāo)準(zhǔn)毒株的免疫血清，以標(biāo)準(zhǔn)的病毒培養(yǎng)物為對照，對分離毒株進行中和試驗，可對病毒分離物予以鑒定。病毒的形態(tài)觀察和理化學(xué)特性檢查，也有一定參考價值。電鏡檢查在感染的細胞核和細胞漿內(nèi)(主要為空泡內(nèi))能發(fā)現(xiàn)結(jié)晶狀排列的病毒。

5.2組織病理學(xué)檢查

對于全身感染的病豬，可采取鼻黏膜或其刮削物作組織染色標(biāo)本檢查，根據(jù)在鼻黏膜管狀腺見到特征性成叢的膨大細胞及嗜堿性核內(nèi)“鷹眼形”包涵體，不難作出診斷。也可根據(jù)組織切片中的嗜堿性核內(nèi)包涵體和巨細胞檢查，或作冰凍切片，用免疫染色法檢測病毒抗原，繼而作出診斷。在急性感染的幼齡仔豬腎和腦等組織，也可見到這種包涵體。

5.3血清學(xué)試驗

血清抗體是確證豬群中存在PCMV最可信的方法，本法也可以用于對剖腹產(chǎn)豬進行監(jiān)測。對育肥豬隨機采取血清樣品做間接免疫熒光試驗或者ELISA試驗測定，將感染病毒的肺泡巨噬細胞或類成纖維細胞用丙酮固定，然后進行間接熒光抗體染色法檢查，其試驗敏感性比病毒中和試驗至少高8倍，而且還可對不同類別的IgG和IgM抗體予以鑒別。人工感染后3周可檢出抗體，6周后達最高值并一直持續(xù)到屠宰�，F(xiàn)場豬的抗體效價多為64～128倍。也可應(yīng)用感染的輸卵管類上皮細胞作ELISA，它與間接熒光抗體具有相同的敏感性�，F(xiàn)場豬在2～3周齡感染病毒，血清抗體在5～6周齡轉(zhuǎn)陽，并呈終生持續(xù)感染。Tajima等(1994)以血紙法建立了ELISA法，并將全血法與血清檢法的抗體效價進行了比較，樣品的吸收值高度相關(guān)(r=0.88)，對26份田間收集血紙的檢查，發(fā)現(xiàn)這些仔豬出生后8周母源抗體水平下降，并從4頭豬中檢出IgM抗體。

PCR技術(shù)Hamel等(1999)首次報道了應(yīng)用PCR診斷本病，采用直接從具有不同臨床綜合征的病豬肺和鼻黏膜的刮削物提取DNA檢查的方法，從126份樣品中檢出59份陽性樣品，該方法有可能成為PCMV檢查和監(jiān)測的常規(guī)方法。之后，F(xiàn)ryer等(2001)用定量競爭PCR對不同的豬器官(包括用于異種移植供體)進行了病毒的檢測，可以從每微克DNA中檢出低于10至97個基因組拷貝。?

6防制措施?

康復(fù)豬血清中雖產(chǎn)生相當(dāng)水平的中和抗體，但不能清除體內(nèi)的病毒，表明本病的免疫力不強。患病母豬的初乳內(nèi)含有中和抗體，可為哺乳仔豬提供一定的保護力。但是在PCMV呈地方性流行的豬場，似乎只有存在循環(huán)的母源抗體時才向外排毒。迄今尚未見有疫苗研制的報道。目前對此病無治療方法，但在發(fā)生鼻炎時，可使用抗菌類藥物控制細菌的繼發(fā)感染。在豬群飼養(yǎng)管理良好時，在有與PCMV有關(guān)的鼻炎和/或SMEDI的地方，疾病的暴發(fā)通常具有自限性。因此要加強飼養(yǎng)管理，尤其是PCMV呈地方性流行的豬群中，引種前要進行隔離和免疫檢測，防止將傳染源引入易感豬群中，導(dǎo)致本病暴發(fā)或激發(fā)原有豬群的潛伏感染。理想的控制措施是通過剖腹產(chǎn)取得豬崽隔離飼養(yǎng)，并進行至少70天的血清學(xué)監(jiān)測，以建立無病毒感染的豬群。?

近年來豬PRRS的廣泛傳播，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失，診斷RRSV的實驗工作也在各地普遍展開，目前在某些病例中，偶爾也會在初次分離PRRSV的豬肺巨噬細胞中發(fā)現(xiàn)PCMV。從無癥狀豬的肺泡巨噬細胞中發(fā)現(xiàn)病毒，說明巨噬細胞是感染源。PCMV能夠抑制宿主的免疫功能和防御機制，尤其是抑制T?細胞的功能，從而影響到感染的后果。相信隨著時間的推移，本病的重要性同PRRS一樣，勢必會引起人們的關(guān)注。PCMV將會得到人們更廣泛地認識。

胞中可看到包涵體。

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