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豬偽狂犬病和傳染性胸膜肺炎混合感染的診斷與防制

84農(nóng)業(yè)網(wǎng)　　時(shí)間：2018-03-14 　　作者：佚名　　來源：網(wǎng)絡(luò)整理

1發(fā)病情況

某場存欄生產(chǎn)母豬593頭，產(chǎn)仔347頭，其中弱仔4頭，占1.2%，木乃伊18頭，占6.95%，死胎51頭，占14.7%。新生仔豬一周齡內(nèi)死亡57頭，占16.4%，斷奶(30天)前死亡81頭，占23.3%，共計(jì)損失211頭。育成率為39.2%。母豬返情率20%。20%左右育肥豬發(fā)病，死亡8頭。?

2臨床癥狀

新生仔豬表現(xiàn)為被毛粗亂、體表蒼白，精神委靡不振、消瘦、喘氣、腹瀉，拉黃色水樣糞便，體溫升高(40～41.5℃)。少數(shù)仔豬出現(xiàn)轉(zhuǎn)圈、發(fā)抖、四肢呈劃水狀等神經(jīng)癥狀。育肥豬呈犬坐式、腹式呼吸、喘氣、體溫升高(39～42℃)，全身發(fā)紺，嚴(yán)重的病豬口吐白沫、四肢呈劃水狀、鳴叫，最終衰竭而死亡。?

3病理變化

現(xiàn)場共剖檢了6頭仔豬，主要表現(xiàn)為：瀕死仔豬腦膜充血、腫脹和出血。鼻黏膜腫脹、出血，有黏液流出；扁桃體腫大、充血直至潰瘍。氣管內(nèi)有大量的滲出液。肺臟呈紫黑或暗紅色變化、水腫、充血，表面出現(xiàn)大小不一的灰白色的化膿灶，橫切面出現(xiàn)血樣泡沫；胸腔積液，肺臟與心包、膈膜、胸腔壁相粘連。腎出現(xiàn)針尖大小、密集的出血點(diǎn)，肝臟出現(xiàn)灰白色壞死灶，脾臟無明顯腫大和梗死現(xiàn)象。?

4豬胸膜肺炎放線桿菌的分離和鑒定

4.1病原菌分離無菌取瀕死仔豬肺、咽喉扁桃體組織，接種到PPLO瓊脂培養(yǎng)基上，置10%CO237℃培養(yǎng)，24h后觀察到直徑1～2mm透明、圓潤的菌落。

4.2涂片鏡檢取上述菌落沫片，經(jīng)革蘭氏染色，觀察到單個(gè)成對的革蘭氏陰性細(xì)小短球桿菌。?

4.3病原菌的純化用接種環(huán)挑取經(jīng)鏡檢選擇的單個(gè)菌落，在PPLO瓊脂培養(yǎng)基上劃線后，置10%CO2，37℃培養(yǎng)，24h后觀察到透明、圓潤、均勻的小菌落。

4.4PCR擴(kuò)增反應(yīng)

4.4.1模板的制備

用接種環(huán)挑取數(shù)個(gè)純化后的菌落至一含40μl無菌三蒸水的EP管中，100℃水浴5～10min，立即放入冰水混合物中，待完全冷卻后，12000r/min離心3min，取上清4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4.4.2反應(yīng)體系(50μl)10倍緩沖液5μl，25mmol/LMgCl?23μl，dNTPs1.0μl，1.5μmol/L上游引物1.5μl，1.5μmol/L下游引物1.5μl，TaqDNA酶0.5μl，無菌三蒸水27.5μl，模板10μl。?

4.4.3反應(yīng)條件94℃預(yù)變性4min后，按94℃1min，65℃40s及72℃1min40s的循環(huán)程序進(jìn)行35次循環(huán)，最后一個(gè)循環(huán)結(jié)束后再延伸10min。?

4.4.4瓊脂糖電泳取PCR擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物8μl和5μlDL2000Marker，分別和1～2μl上樣緩沖液混勻后，加到含EB的0.8%瓊脂糖膠中，在80伏電壓下電泳20min，然后在紫外線燈下觀察。預(yù)期擴(kuò)增的靶基因?yàn)锳PP外膜脂蛋白基因中610bp大小的片段。?

5偽狂犬病病原的鑒定(PCR反應(yīng))?

5.1模板制備將6頭瀕死豬腦、肝等組織混合取樣，用1∶5生理鹽水勻漿，取1ml到一無菌的EP管中，-20℃反復(fù)凍融3次，加0.1mg/ml蛋白酶K和0.5%SDS50℃作用3h或37℃過夜。酚∶仿∶異戊醇(25∶24∶1)抽提兩次，用0.6倍體積的異丙醇沉淀，再用75%乙醇洗滌，抽干后，溶于50μl無菌水中，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

?5.2反應(yīng)體系(25μl)10倍緩沖液2.5μl，25mmol/LMgCl?22.5μl，dNTPs2.0μl，上游引物2.0μl，下游引物2.0μl，TaqDNA酶0.5μl，模板2.0μl，滅菌蒸餾水11.5μl。

?5.3反應(yīng)條件94℃預(yù)變性4min后，按94℃1min，65℃40s及72℃90s的循環(huán)程序進(jìn)行30次循環(huán)，最后一個(gè)循環(huán)結(jié)束后再延伸10min。?

5.4擴(kuò)增產(chǎn)物的觀察4.4.4，預(yù)期擴(kuò)增的靶基因?yàn)镻RVgD基因中217bp大小的片段。

5.5結(jié)果?

5.5.1胸膜肺炎放線桿菌檢測結(jié)果見圖1。?

待檢樣品中胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測結(jié)果（略）

從中可以發(fā)現(xiàn)：在6個(gè)待檢樣品中有2個(gè)擴(kuò)出610bp特異性條帶，說明該患豬已經(jīng)感染豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌。

待檢樣品中偽狂犬病病毒的檢測結(jié)果（略）?

從中可以發(fā)現(xiàn)：在6個(gè)待檢樣品中有3個(gè)擴(kuò)出217bp特異性條帶，說明該患豬已經(jīng)感染偽狂犬病病毒。?

6防制?

6.1豬傳染性胸膜肺炎是近幾年來出現(xiàn)的新呼吸道疾病，臨床上主要以呼吸困難、肺和胸壁粘連為特征；而偽狂犬病可引起繁殖障礙，表現(xiàn)為死胎，流產(chǎn)和產(chǎn)弱仔。本文通過病原學(xué)檢測最終確診了這兩種疾病呈混合感染。在被檢的6頭仔豬中，偽狂犬病呈陽性的有3頭，而傳染性胸膜肺炎呈陽性僅2頭，兩種同時(shí)呈陽性的有2頭，從流行病學(xué)特征來分析。本次疾病的流行除了引起仔豬的大量死亡外，母豬的繁殖障礙尤其突出，因此，可以認(rèn)為本次疾病的流行是以偽狂犬病為主，伴發(fā)豬傳染性胸膜肺炎。

?6.2針對APP血清型較多的特點(diǎn)，在本次暴發(fā)疾病的控制中，我們采用從送檢病料中分離的病原菌擴(kuò)大培養(yǎng)增殖后，制成滅活苗緊急接種，母豬用氟哌酸，每噸飼料150g拌料給藥。同時(shí)對母豬群采用本實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)的偽狂犬基因缺失滅活苗免疫，并使用偽狂犬病gG基因缺失活疫苗滴鼻免疫。采取上述措施后一周，疫情得到完全控制。

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