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84農(nóng)業(yè)網(wǎng) 時(shí)間：2018-03-14 作者：佚名 來源：網(wǎng)絡(luò)整理
Krell等(1988)率先將核酸探針技術(shù)應(yīng)用于PPV的診斷，他們將以PPVRFDNA酶切得來的3.0kb的DNA片段用放射性同位素標(biāo)記后，作為探針通過打點(diǎn)雜交檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞中的PPV。結(jié)果發(fā)現(xiàn)最低可檢測(cè)0.1pgDNA。與HA的比較結(jié)果表明，該方法比HA敏感100倍以上。國內(nèi)吳保成等(1992)對(duì)PPVRFDNA的HindIII和PstI片段，進(jìn)行生物素標(biāo)記后用作探針進(jìn)行斑點(diǎn)雜交。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該探針能檢測(cè)到約100pg的PPVDNA。侯喜林等(1997)同樣利用PPVDNA的HindIII和PstI片段進(jìn)行地高辛標(biāo)記后用作探針檢測(cè)PPVDNA，結(jié)果能與其自行分離的7株P(guān)PV毒株的DNA雜交，最低檢出限量為40pgDNA。之后，他們又將該探針用于臨床檢測(cè)PPV感染獲得成功(侯喜林等，1998)。地高辛標(biāo)記探針與放射性標(biāo)記探針相比具有相同的敏感性，并且克服了生物素標(biāo)記探針敏感性差、背景深的特點(diǎn)，因此是探針標(biāo)記中較為理想的方法。核酸探針技術(shù)用于PPV抗原的檢測(cè)比HA試驗(yàn)敏感、特異性強(qiáng)，適宜于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行PPV感染的診斷，但該方法的技術(shù)含量高，只能在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，不適合大面積臨床診斷和現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。
1985年，美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室Mullis等人發(fā)明了具有劃時(shí)代意義的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），使人們夢(mèng)寐以求的體外大量擴(kuò)增核酸片段的愿望成為現(xiàn)實(shí)。之后，該技術(shù)應(yīng)用到了疾病診斷方法中。Moliter等(1991)根據(jù)PPV基因組序列設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，擴(kuò)增VP2基因中158bp的片段，利用酶切和探針雜交證實(shí)了擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性，同時(shí)對(duì)四株P(guān)PV及CPV、PRV的擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了PCR反應(yīng)的特異性，該方法至少可以檢出100fg的PPVDNA，相當(dāng)于1PFU的PPV量。國內(nèi)，趙俊龍等利用擴(kuò)增PPVVP2基因中的445bp片段，使PCR診斷結(jié)果更易于判讀，同時(shí)建立了PPV和PRV二聯(lián)診斷方法。
綜上所述，用于PPV感染的診斷方法很多，各種方法具有不同的優(yōu)缺點(diǎn)，相對(duì)而言，目前應(yīng)用較多的是HA和HI試驗(yàn)，這兩種方法基本能滿足常規(guī)的病原檢測(cè)和血清流行病學(xué)調(diào)查等需要。要得到病原學(xué)的確診，則最好利用病毒分離鑒定方法，這時(shí)免疫熒光技術(shù)經(jīng)常成為首選。
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