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豬繁殖與呼吸綜合征病理組織學(xué)觀察

84農(nóng)業(yè)網(wǎng)　　時(shí)間：2018-03-14 　　作者：佚名　　來源：網(wǎng)絡(luò)整理

摘　要：采集患有豬繁殖與呼吸綜合征的病死豬肺臟、肝臟、脾臟和淋巴結(jié)，經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟、切片、HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察以上各臟器的病理變化。結(jié)果表明，各臟器主要病理變化是出血和淤血；肺臟的細(xì)支氣管萎縮，肺泡壁上皮巨噬細(xì)胞增生；肝臟有顆粒變性，脾臟白髓周圍有“紅暈”；淋巴結(jié)淋巴中心細(xì)胞壞死。

關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征；病理組織學(xué)；觀察

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)引起的以成年母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道癥狀及斷奶仔豬高病死率為特征的病毒性傳染病之一[1]，臨床見癥狀主要表現(xiàn)為妊娠母豬妊娠后期流產(chǎn)、死產(chǎn)、弱仔明顯增多、分娩率下降及斷奶仔豬的肺炎，生長遲緩，且常伴發(fā)細(xì)菌混合感染；吮乳仔豬和斷奶仔豬出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸道癥狀[2]。本試驗(yàn)通過對(duì)采集的病料進(jìn)行病理組織切片的制作，然后在光學(xué)顯微鏡下觀察機(jī)體在患病狀態(tài)下組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)的變化，并結(jié)合臨床癥狀和對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病理組織學(xué)變化進(jìn)行描述，為進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1　材料

患有豬繁殖與呼吸綜合征的萊陽某豬場的病死豬，采集肝臟、肺臟、脾臟和淋巴結(jié)。病毒的分離鑒定按文獻(xiàn)[3]進(jìn)行。

1.2　主要試劑和儀器

100mL/L中性福爾馬林溶液，梯度乙醇，二甲苯，HE染色液；生物病理切片機(jī)QPJ1B(天津天利航空機(jī)電有限公司)，高級(jí)切片石蠟(熔點(diǎn)為54℃～56℃，上海華永石蠟有限公司)，電熱恒溫水浴槽(上海醫(yī)用器械三廠)，載玻片(鹽都縣騰達(dá)塑玻制品廠)，六聯(lián)電子調(diào)溫萬用電爐(龍口市先科儀器公司)，電熱恒溫箱(龍口先科儀器公司)，光學(xué)顯微鏡OLYMPUSCH2，奧林巴斯數(shù)碼相機(jī)(日本奧林巴斯集團(tuán))。

1.3　方法

剖檢病豬并，集肝臟、肺臟、脾臟和淋巴結(jié)，切成厚度大約為5mm組織塊，用100mL/L的中性福爾馬林固定，固定24h后，經(jīng)過流水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片(厚度6μm)，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。

2　結(jié)果

2.1　臨床癥狀

臨床發(fā)現(xiàn)少數(shù)病豬可見耳朵、腹部、腿部紫紺，咳嗽，食欲減退或廢絕。病死豬外觀尸僵完全，皮膚色淡似蠟黃，鼻孔有帶血泡沫。剖檢發(fā)現(xiàn)皮下脂肪較黃，稍微有水腫。肺臟病變呈間質(zhì)性肺炎癥狀，有的肺臟呈灰褐色，肺尖葉、中葉和后葉病變無明顯差異；肝臟有的萎縮，有的輕度腫脹，色褐質(zhì)脆，個(gè)別有灰白樣壞死；脾臟腫大，呈紫黑色半透明的出血病變。

2.2　病理組織學(xué)觀察

2.2.1　肝臟　肝細(xì)胞普遍發(fā)生變性，壞死，核溶解，呈蜂窩狀，肝竇擴(kuò)大，并有淤血。肝匯管區(qū)有少量組織細(xì)胞浸潤以及成纖維細(xì)胞增生。匯管區(qū)附近或中央靜脈周圍見部分肝細(xì)胞發(fā)生變性(圖1A)。

2.2.2　肺臟　主要表現(xiàn)為局灶性支氣管炎，見支氣管黏膜上皮脫落進(jìn)入管腔，支氣管周邊有組織細(xì)胞浸潤以及成纖維細(xì)胞增生，這可能是導(dǎo)致仔豬呼吸障礙的直接原因。肺泡壁細(xì)胞腫脹，變圓，巨噬細(xì)胞數(shù)量增多，附近其他區(qū)域可見肺泡氣腫，幾個(gè)肺泡互相融合(圖1B)。

2.2.3　脾臟　脾臟光鏡下觀察可見脾組織失去正常固有組織，脾小體的結(jié)構(gòu)不完整或消失，并且脾小體周圍有“紅暈”。脾臟毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，脾小體內(nèi)有彌散性出血細(xì)胞，并且有纖維素性微血栓。脾臟中央動(dòng)脈周圍淋巴鞘內(nèi)的T淋巴細(xì)胞增多，脾竇內(nèi)有中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(圖1C)。

2.2.4　淋巴結(jié)　淋巴小結(jié)的結(jié)構(gòu)不完整，發(fā)生中心形成不完全，淋巴結(jié)外膜出血。生發(fā)中心輕微出血，淋巴中心細(xì)胞壞死；毛細(xì)血管后微靜脈有少量淤血，淋巴小結(jié)內(nèi)的B淋巴細(xì)胞減少，呈彌散分布

3　討論

PRRSV首要侵害的器官是肺臟，肺臟大量的巨噬細(xì)胞被破壞，因此在肺臟的病理組織切片中有許多脫落的巨噬細(xì)胞。試驗(yàn)所觀察到的肺臟的病理變化與GloriaSM[4]報(bào)道的PRRSV感染豬后2h豬的肺泡巨噬細(xì)胞吞噬能力增強(qiáng)，而在感染后7d肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬能力明顯減弱，從而引起免疫抑制相吻合。

淋巴結(jié)和脾臟都是機(jī)體的外周免疫器官，是成熟的T細(xì)胞和B細(xì)胞棲居、增殖和對(duì)抗原刺激產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場所，脾臟的脾小體結(jié)構(gòu)不完整，被出血的紅細(xì)胞所覆蓋，脾小體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞減少，中央動(dòng)脈周圍淋巴鞘內(nèi)的T淋巴細(xì)胞增多，淋巴小結(jié)的結(jié)構(gòu)不明顯，小結(jié)內(nèi)的B淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，且呈彌散性分布，副皮質(zhì)區(qū)增寬，說明T淋巴細(xì)胞數(shù)目增多。由此可知，PRRSV可能影響機(jī)體的細(xì)胞免疫，這恰好驗(yàn)證了PRRSV能引起免疫抑制[5]的結(jié)論。

本病的主要病理變化在肺臟，因此應(yīng)該首先取肺臟，臟器的上皮組織易變質(zhì)，應(yīng)爭取在死后30min內(nèi)處理完畢。組織塊力求小而薄，以使固定液能迅速而均勻地滲入組織塊內(nèi)部。切取組織塊用的刀具要鋒利，切割時(shí)不可來回挫動(dòng)。熟悉某些器官的組成，然后決定其切面的走向。切除不需要的部分，尤其是組織的脂肪滴等，應(yīng)盡可能清除掉。制片過程中對(duì)肺臟進(jìn)行抽氣[6]處理，能使肺臟達(dá)到良好的固定效果和切片效果。在切片及染色過程中，切片的厚度直接影響觀察效果，切片太厚，細(xì)胞重疊，細(xì)胞病變觀察不明顯[7]；切片太薄容易破碎，做不出完整的切片。脫水、透明的時(shí)間要嚴(yán)格掌握，脫水和固定時(shí)間過長都會(huì)使組織塊收縮而不利于進(jìn)行切片。染色時(shí)，蘇木素染色時(shí)間應(yīng)在15min左右，時(shí)間過長則染色過深，不利于觀察病變[8]；在10mL/L鹽酸乙醇和碳酸鋰飽和溶液里所待的時(shí)間分別是5s和30s。染色的時(shí)間的掌握應(yīng)嚴(yán)格控制，否則將直接影響切片的質(zhì)量。

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