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84農(nóng)業(yè)網(wǎng) 時間:2018-03-14 作者:佚名 來源:網(wǎng)絡整理
3、病理學變化
PRRS缺乏特征性的病理變化,感染毒株的毒力不同,其病理變化也不一樣。在臨床上顯現(xiàn)期和瀕死期主要表現(xiàn)為急性敗血癥。一般來說患急性PRRS的豬,肺臟呈紅褐花斑狀,不塌陷,感染部與健康部界線不明顯,常出現(xiàn)在肺前腹側;淋巴結中度到重度腫大,腹股溝淋巴結最明顯;胸腔內(nèi)有大量的清亮的液體。顯微鏡下可見彌漫性間質性肺炎并伴有嗜中性粒細胞浸潤,全身性的巨噬細胞和血管內(nèi)皮細胞腫大、活化或增生;廣泛性的微循環(huán)障礙和非化膿性腦炎等病理變化。這些變化中,新生仔豬最明顯,其次是哺乳仔豬,然后是斷奶后肥育豬。
4、現(xiàn)代實驗室檢驗診斷
⑴病毒的分離
病毒分離是有效診斷PRRS的方法,但對用過弱毒疫苗的豬場需要對分離物做進一步的鑒定,沒有用過弱毒疫苗的豬場也有可能通過帶毒精液或其他途徑感染疫苗毒,而疫苗毒比強毒株更能適應細胞培養(yǎng)。PRRSV分離最好采集病豬的死胎或病豬的肺、脾、心、腎、腦、淋巴結、扁桃體、腹水、胸腺和骨髓勻漿制成懸液,經(jīng)雙抗和病毒過濾器處理后,接種豬原代肺泡巨噬細胞(PAM)或Marc145細胞。初次分離時不出現(xiàn)細胞病變或病變不明顯,盲傳幾代后可出現(xiàn)典型的特征性病變:細胞變圓,聚集成堆,并呈灶狀脫落。此外,該病毒對溫度和pH很敏感,所以在樣品保存和運輸時要特別注意。但由于整個試驗的周期長,費用高,因而不適用于臨床診斷,主要用于實驗室研究。
⑵抗原檢測
①熒光標記單株抗體法:使用該方法可檢查患豬肺、脾組織切片,檢測PRRS病毒抗原所在位置。
②反轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法:本法具有敏感、特異、快速、簡便、準確等優(yōu)點,已廣泛用于某些RNA病毒的檢測。其技術路線是:病毒培養(yǎng)→提純病毒粒子→抽提病毒RNA→設計引物→RT-PCR→瓊脂糖凝膠電泳→測序。目前RT-PCR已廣泛應用于PRRSV的鑒定和臨床診斷,可以檢測血液、精液及組織樣品中的病毒核酸,感染后24小時可檢出病毒核酸,而血清學試驗要在感染后9天左右才能檢出,RT-PCR敏感性更高,還能準確反映持續(xù)性感染個體的實際帶毒狀態(tài),其擴增的目的片段也主要是針對PRRSV的核衣殼蛋白基因。RT-PCR提供了一種良好的可替代細胞培養(yǎng)檢測PRRSV的方法。利用特異性引物進行RT-PCR還可以區(qū)分不同基因型的PRRSV毒株。
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