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84農(nóng)業(yè)網(wǎng) 時間:2018-03-14 作者:佚名 來源:網(wǎng)絡(luò)整理
豬的胚胎移植是進行豬胚胎工程,如體外受精、胚胎切割、性別決定、胚胎克隆、基因?qū)、嵌合體的制作、配子和胚胎冷凍保存等項生物技術(shù)的關(guān)鍵技術(shù)之一。
1.供體豬和受體豬的選擇進行胚胎移植的豬無論是供體還是受體都應(yīng)具備以下基本條件:
(1)供體或受體豬都應(yīng)具備在麻醉下能經(jīng)受手術(shù)的體質(zhì),無全身性疾病,生殖系統(tǒng)未受感染。
(2)供體豬應(yīng)滿足胚胎移植目標(biāo)所要求的遺傳學(xué)條件。
(3)受體豬應(yīng)是適合妊娠、分娩和哺乳的母豬。
2.超數(shù)排卵和胚胎收集
(1)超數(shù)排卵豬是多胎動物,一次發(fā)情可排卵10-15個。若用激素處理則排卵數(shù)還可再增加。給供、受體母豬同時肌肉注射一針PMSG(1000-1500IU),72h后注射500IU的hCG,供體在hCG注射后24h和48h兩次配種輸精,2―5天可以手術(shù)采卵。受體做發(fā)情記錄但不輸精。
(2)胚胎收集胚胎的采集一般采用手術(shù)方法。胚胎的發(fā)育階段不同,收集的部位也不一樣,4細(xì)胞期以前的胚胎可從輸卵管采集,4細(xì)胞期以后的胚胎應(yīng)從子宮內(nèi)采集。
手術(shù)采卵法程序如下:
①手術(shù)淮備術(shù)前24h停止喂食,僅給予飲水。
②全身麻醉按體重注射鹽酸氯受酮、846并配合使用乙醚進行麻醉。
③固定和術(shù)部消毒用皂水和毛刷洗刷腹部和大腿內(nèi)側(cè)部,將切口部周圍剃毛,水洗后用毛巾揩干。廣泛涂上手術(shù)用聚乙烯吡咯酮碘液,加少量水,用毛刷刷洗。用滅菌紗布揩干,再涂上手術(shù)用聚乙烯毗咯酮碘液,用酒精棉揩凈。
④開腹從最后乳頭和恥骨前端的中間,在距肚臍3―5厘米的正中線切開皮膚8―10厘米,沿著切口左右分開皮下脂肪,使腹膜露出后,用鈍頭剪刀剪開腹膜。
⑤沖卵用插進切口的手將子宮角引向切口,從切口處暴露子宮角、輸卵管和卵巢,抓住所見卵巢。將導(dǎo)管插入到子宮角,另一頭與玻璃插管連接,插入接收沖卵液的試管。裝有鈍針的注射器插入到輸卵管并注入沖洗液,使沖洗液經(jīng)輸卵管向子宮角流去,沖洗結(jié)束后要認(rèn)真觀察并記錄卵巢情況(黃體數(shù)、殘留卵泡數(shù)、殘留卵泡的大小以及排卵情況)。
⑥縫合。把卵巢、子宮角納入腹腔,向腹腔注入防粘連劑和抗生素。為防止腹部疝氣產(chǎn)生,縫合時對腹膜要尤加注意。作結(jié)節(jié)或連續(xù)縫合。腹膜縫合后撒布磺胺粉,縫合脂肪層,最后結(jié)節(jié)或褥狀縫合皮膚?p合后在術(shù)部涂上稀碘酊。
胚胎收集后,在顯微鏡下進行質(zhì)量評定,選擇形態(tài)正常,發(fā)育階段與時間相符的胚胎進行移植。
3.胚胎移植手術(shù)移植與手術(shù)采卵一樣,先進行麻醉、仰臥保定等,然后切開正中線,使子宮角等露出。把位于離子宮―輸卵管接合部約5厘米處的子宮角下方的子宮系膜用拇指和食指牢牢固定,避開子宮角背面能看到的血管,用鈍針垂直于表面刺入到子宮角內(nèi)腔,制成小孔。再將預(yù)先吸有胚胎的巴斯德吸管從小孔垂直插入子宮角腔內(nèi),移植的部位是在子宮角頂端附近,將約有0.1―0.2mml保存液一起把胚胎注入子宮腔,一般每頭豬可移植15―20枚胚胎。
4.供體和受體術(shù)后觀察供體在下次發(fā)情時(或全過一個情期)即可照常配種,或經(jīng)過2―3個月重復(fù)作供體。受體如果發(fā)情,說明胚胎移植失;如未發(fā)情,再繼續(xù)觀察,在適當(dāng)時期進行妊娠檢查,如確已妊娠,則應(yīng)加強飼養(yǎng)管理。
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