1.取材選擇需要進行脫毒的甘薯品種,大田收獲后徹底清洗消毒,排種在干凈的消毒過的細沙、沙加土或蛭石中,保持28~32℃左右。經(jīng)常浸潤,促其發(fā)芽,當薯塊幼苗長至10~15厘米(2~3周時間)時可切取頂端做莖尖組織培養(yǎng)。
2.消毒切取莖尖2~3厘米長,先用0.1%的洗衣粉攪洗5~10min,然后用自來水沖洗30min。隨后在超凈工作臺上用70%的酒精浸泡半分鐘,再用5%的次氯酸鈉溶液消毒10min,無菌蒸餾水清洗3次。
3.切取莖尖在無菌操作條件下,將消毒的莖尖置于體視解剖鏡下,用解剖刀削去小葉片,切取附帶1~2個葉原基的莖尖,長約0.2~0.4毫米。
4.接種將長約0.2~0.4毫米的莖尖用經(jīng)酒精燈火焰消毒的槍狀鑷接種到培養(yǎng)試管中,管內裝有0.7%瓊脂固化,附加適量激素的MS培養(yǎng)基,然后用鋁泊紙蓋上管口,置入溫度28~30℃、光強3000~4000lx、光照16h的培養(yǎng)室內培養(yǎng)試管苗。
5.轉管7~14天,待莖尖分生組織轉綠并分化出芽后,轉移到不加激素的1/2MS培養(yǎng)基上生長,培養(yǎng)條件為溫度26~28℃、光強1000~16001x、光照14h,經(jīng)2~3個月后莖尖分生組織將長成具有2~3個葉片的完整植株。經(jīng)過上述程序培育的幼苗再經(jīng)過病毒檢測、優(yōu)良株系評選、高級脫毒苗快繁、脫毒原原種繁殖、脫毒原種繁殖、脫毒良種繁殖等幾道工序生產(chǎn)的甘薯苗在普通地塊上種植,收獲的種薯為脫毒良種,為大面積脫毒用種。
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